Rory McIlroy och Matt Fitzpatrick förlorade sin match mot Patrick Cantlay och Wyndham Clark.
Allt avgjordes på det sista hålet.
När McIlroy skulle putta strax efter att Cantlay satt sin putt stördes han av motståndarens caddie.
– Jag var där på 18:e green. Jag såg vad som hände när Cantlay satte putten. Joe Lacava (caddien) viftade sin keps. Rory (McIlroy) bad honom vänligt att flytta på sig för att han stod i vägen. Men han stod kvar och fortsatte att vifta med kepsen, säger Luke Donald.
McIlroy missade, förlorade matchen, och därefter utbröt ett bråk på parkeringen där McIlroy konfronterade sina motståndare.
– Ryder Cup är alltid passionerat. Vi går ut med tolv starka spelare imorgon och jag kommer inte fatta några beslut baserat på det som hände, säger Donald.
– Det här blir tändvätska för imorgon, sa Rory McIlroy direkt efter förlusten på 18:e green.
Europa leder med 10,5–5,5 inför de avslutande singelrundorna. McIlroy och Cantlay möter inte varandra.