Kravet gäller obetald men utförd ambulansdirigering från november 2011 till juni 2013, enligt Medhelp.
Bolaget fick viss ersättning enligt ett tillägsavtal, men det gällde bara framtida ersättning och inte de tidigare kraven.
Medhelps krav på just landstinget i Uppsala uppgår till nästan hälften av det 25 miljonerna.
– Vi tillbakavisar helt deras krav, säger landstingets chefsjurist Jens Larsson till ABC. Men vi är inte överraskade. Det här är ju en pågående konflikt med Medhelp sedan de slutade sköta ambulansdirigeringen åt oss.
Landstinget återgår till SOS Alarm.
För några dagar sedan överklagade Medhelp också landstingen i Uppsala, Västmanland, Sörmland och region Gotlands avtal med SOS Alarm till Förvaltningsrätten.
Medhelp menar att avtalen antingen är ogiltiga eller att det handlar om otillåten direktupphandling.
SOS Alarm ska alltså ta över ambulansdirigeringen när det nuvarande avtalet går ut i november, även det vill Medhelp stoppa.